Plasmide CRISPR d'Activation (h) CIP2A: sc-401363-ACT

L’inhibiteur cancéreux de la PP2A (CIP2A) code une oncoprotéine humaine qui inhibe la phosphatase sérine/thréonine PP2A, maintenant ainsi une signalisation dépendante de la phosphorylation et stabilisant des facteurs pro‑croissance tels que MYC. En antagonisant l’activité suppresseur de tumeur de PP2A, CIP2A soutient des voies prolifératives et pro‑survie, notamment les signalisations PI3K/AKT et MAPK, et contribue à des altérations de la progression du cycle cellulaire et des réponses au stress. Une expression élevée de CIP2A a été rapportée dans de nombreux types tumoraux et est associée à des phénotypes agressifs et à des états de signalisation liés à la résistance, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des réseaux oncogéniques contrôlés par les phosphatases.

CIP2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CIP2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIP2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CIP2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CIP2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIP2A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CIP2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIP2A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIP2A dans les cellules tumorales présentant une expression de CIP2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.