CIITA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401762-ACT

Humanes CIITA (class-II-Transaktivator des Haupthistokompatibilitätskomplexes) ist ein zentraler transkriptioneller Master-Regulator, der die induzierbare Expression von MHC-Klasse-II-Genen und zugehörigen Komponenten der Antigenprozessierung koordiniert. Als nachgeschalteter Faktor von Zytokin- und angeborenen Immunreizen, einschließlich interferongetriebener Signalwege, integriert CIITA Transkriptionsprogramme, die Antigenpräsentation, die Priming-Phase der adaptiven Immunantwort und zelltypspezifische Immunreaktivität steuern. Eine dysregulierte CIITA-Aktivität verändert die Immunüberwachung und inflammatorische Signalgebung und ist relevant für Defekte der Antigenpräsentation, autoimmunitätsassoziierte Genexpressionsmuster sowie Mechanismen der Tumor-Immunevasion. Als nicht an DNA bindender Koaktivator, der Enhanceosom-Komplexe an MHC-II-Promotoren assembliert, wird CIITA häufig genutzt, um die transkriptionelle Kontrolle von HLA-Loci und die Umgestaltung immunologischer Phänotypen in diversen Zellmodellen zu untersuchen.

CIITA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CIITA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CIITA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CIITA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CIITA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CIITA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CIITA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CIITA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CIITA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CIITA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.