Plasmide CRISPR d'Activation (h) CIITA: sc-401762-ACT

Le CIITA humain (class II major histocompatibility complex transactivator) est un régulateur transcriptionnel maître qui coordonne l’expression inductible des gènes du CMH de classe II (MHC II) ainsi que des composants associés au traitement des antigènes. Agissant en aval des signaux cytokiniques et de l’immunité innée, notamment des voies de signalisation induites par les interférons, CIITA intègre des programmes transcriptionnels qui contrôlent la présentation de l’antigène, l’amorçage de l’immunité adaptative et la réactivité immunitaire spécifique au type cellulaire. Une activité de CIITA dysrégulée modifie la surveillance immunitaire et la signalisation inflammatoire, avec des implications pour les défauts de présentation antigénique, des profils d’expression génique associés à l’auto-immunité et les mécanismes d’échappement tumoral au système immunitaire. En tant que coactivateur ne se liant pas à l’ADN, qui assemble des complexes d’« enhanceosome » sur les promoteurs du CMH II, CIITA est largement utilisé pour étudier le contrôle transcriptionnel des loci HLA et le remodelage du phénotype immunitaire dans divers modèles cellulaires.

CIITA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CIITA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIITA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CIITA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CIITA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIITA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CIITA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIITA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIITA dans les cellules tumorales présentant une expression de CIITA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.