CIB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405501-ACT

O CIB1 humano (proteína 1 de ligação a cálcio e integrina) codifica a CIB, um regulador de ligação a cálcio do tipo EF-hand, miristoilado, que acopla sinais de Ca²⁺ à adesão dependente de integrinas e ao remodelamento do citoesqueleto. O CIB1 participa de redes de sinalização que influenciam a dinâmica das adesões focais, respostas de plaquetas e de células endoteliais e vias de adaptação ao estresse ligadas à sobrevivência e migração celulares. Por meio de interações com as caudas citoplasmáticas de integrinas e com outras proteínas de sinalização, o CIB1 pode modular a atividade de quinases e programas transcricionais a jusante que afetam proliferação e motilidade. Expressão ou sinalização desregulada de CIB1 tem sido relatada em contextos relevantes para a biologia vascular, mecanismos relacionados à trombose e invasão e metástase associadas ao câncer, sustentando seu uso como alvo mecanístico em estudos de vias.

CIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CIB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CIB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CIB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CIB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CIB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CIB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CIB em células tumorais com expressão de CIB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.