chordin Double Nickase Plasmid (h): sc-404997-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das chordin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- chordin Double-Nickase-Plasmid (h) und chordin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
chordin Double Nickase Plasmid (h) | sc-404997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
chordin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CHRD** kodiert **Chordin**, ein sezerniertes Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das die **BMP-Signalübertragung** antagonisiert, indem es an **BMP2/4/7** bindet und dadurch die Rezeptorbindung begrenzt. Durch die Prägung der **BMP-Gradientenbildung** und die Modulation der **SMAD1/5/9-Phosphorylierungs**-Signalausgänge trägt Chordin zur Kontrolle der **dorsoventralen Musterbildung**, der **Mesoderminduktion** und der **Organogenese** bei und ist weiterhin relevant für Signalwege, die die **osteogene** und **chondrogene Differenzierung** steuern. Eine veränderte CHRD-Aktivität kann das Gleichgewicht entwicklungsbiologischer Signalgebung stören und wurde im Zusammenhang mit **angeborenen Fehlbildungen** sowie fehlregulierten Prozessen des **Gewebeumbaus** untersucht. In Kultursystemen wird eine Störung von CHRD häufig genutzt, um das **Crosstalk** des BMP-Signalwegs mit **WNT-** und **TGF-β-Signalgebung** zu untersuchen und die extrazelluläre Regulation der **Verfügbarkeit von Morphogenen** zu analysieren.
chordin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.