ChoK Double Nickase Plasmid (h): sc-403793-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ChoK Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ChoK Double-Nickase-Plasmid (h) und ChoK Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHKA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ChoK: sc-376489
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ChoK Double Nickase Plasmid (h) | sc-403793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ChoK Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHKA kodiert die Cholin-Kinase Alpha (ChoK), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym, das im Kennedy-Weg der Phosphatidylcholin-Biosynthese Cholin zu Phosphocholin phosphoryliert. Durch die Kontrolle der Phosphocholin-Pools beeinflusst ChoK die Membranbiogenese, die Lipidsignalgebung und metabolische Umprogrammierungen, die Proliferation und Stressanpassung unterstützen. Die CHKA-Aktivität greift über den breiteren Phospholipidstoffwechsel in PI3K–AKT- und MAPK-gekoppelte Wachstumsprogramme ein und wirkt sich dabei auf die Organellenfunktion sowie den membranabhängigen Transport und die Membran-assoziierte Trafficking-Dynamik aus. Eine Dysregulation von CHKA und erhöhte Phosphocholinspiegel wurden mit einer veränderten Lipidhomöostase in der Krebsbiologie und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch abnorme Membransynthese und Signalübertragung gekennzeichnet sind.
ChoK Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHKA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHKA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHKA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHKA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.