Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CHMP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406179
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CHMP6 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CHMP6-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CHMP6: sc-398963
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CHMP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406179 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CHMP6 (charged multivesicular body protein 6) ist ein zentraler Bestandteil der ESCRT-III-Maschinerie, die den Umbau endosomaler Membranen und die Biogenese multivesikulärer Körper (MVBs) koordiniert und dadurch Fracht-Sortierung sowie lysosomalen Abbau ermöglicht. Über ESCRT-abhängige Membranabschnürung trägt CHMP6 zur Regulation der Rezeptor-Downmodulation, des exosomenbezogenen Transports sowie allgemeiner Prozesse der Proteostase- und Signalhomöostase bei. Störungen des ESCRT-Signalwegs wurden mit Defekten im endolysosomalen Transport, der Zytokinese, Autophagie und dem viralen Budding in Verbindung gebracht – Prozesse, die bei Krebs und Neurodegeneration häufig verändert sind. Daher wird CHMP6 routinemäßig hinsichtlich seines Beitrags zu Vesikeltransport-Phänotypen, zur Dynamik der Rezeptorsignalgebung und zu Stressantworten im Zusammenhang mit endosomaler Dysfunktion untersucht.
Das CHMP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CHMP6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CHMP6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CHMP6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CHMP6-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CHMP6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CHMP6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CHMP6-Exone abzielen, die für die CHMP6-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CHMP6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CHMP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CHMP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CHMP6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CHMP6 HDR-Plasmid (h) und CHMP6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CHMP6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CHMP6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.