CHMP4B Double Nickase Plasmid (h): sc-401802-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CHMP4B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CHMP4B Double-Nickase-Plasmid (h) und CHMP4B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHMP4B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CHMP4B Double Nickase Plasmid (h) | sc-401802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHMP4B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHMP4B (charged multivesicular body protein 4B) ist eine zentrale Komponente des ESCRT-III-Komplexes, der Membran-Remodellierungsprozesse antreibt, die für die endosomale Sortierung und die Biogenese multivesikulärer Körper (MVBs) erforderlich sind. Durch Polymerisation an Membranen und die Koordination mit der ATPase-Aktivität von VPS4 unterstützt CHMP4B die Sequestrierung von Fracht, die Bildung intraluminaler Vesikel sowie die finalen Schritte der zytokinetischen Abtrennung (Abscission) und verknüpft es damit mit Signalwegen, die Rezeptor-Downregulierung und Membranabschnürung steuern. Die CHMP4B-abhängige ESCRT-Funktion trägt außerdem zur Reparatur der Plasmamembran sowie zu Aspekten der Autophagie und der lysosomalen Homöostase über den endolysosomalen Transport bei. Genetische Störungen von ESCRT-III-Komponenten, einschließlich CHMP4B, sind mit Defekten in Zellteilung und Proteostase assoziiert und wurden sowohl im Kontext neurodegenerativer und okulärer Erkrankungen als auch mit veränderter Signalübertragung in krebsrelevanten endozytotischen Netzwerken in Verbindung gebracht.
CHMP4B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHMP4B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHMP4B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHMP4B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHMP4B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.