Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Chk2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400438-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Chk2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Chk2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Chk2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHEK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Chk2: sc-17747
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Chk2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Chk2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK2 kodiert die Checkpoint-Kinase 2 (Chk2), eine Serin/Threonin-Kinase, die nach DNA-Doppelstrangbrüchen nachgeschaltet von ATM aktiviert wird. Nach der Phosphorylierung leitet Chk2 die DNA-Schadenssignalgebung weiter und reguliert über Substrate wie p53, CDC25-Phosphatasen und BRCA1 Zellzyklus-Checkpoints, die Koordination der DNA-Reparatur und die Apoptose. Dieser Signalweg verknüpft Signale genomischen Stresses mit der Kontrolle der Replikation, um die Genomintegrität während der S‑Phase und der Mitose zu erhalten. Eine fehlregulierte CHEK2/Chk2-Signalgebung sowie erbliche oder erworbene Varianten werden mit Phänotypen genomischer Instabilität und einer erhöhten Krebsanfälligkeit in Verbindung gebracht, weshalb CHEK2 häufig als Knotenpunkt zur Untersuchung der Schaltkreise der DNA-Schadensantwort genutzt wird.
Chk2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHEK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHEK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHEK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHEK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.