Plasmide Double Nickase (h) Chk2: sc-400438-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Chk2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Chk2 Double Nickase (h) et le plasmide Chk2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHEK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Chk2 Antibody (A-11): sc-17747
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Chk2 | sc-400438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Chk2 | sc-400438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK2 code pour la kinase de point de contrôle 2 (Chk2), une kinase sérine/thréonine activée en aval d’ATM en réponse aux cassures double brin de l’ADN. Après phosphorylation, Chk2 relaie le signal de dommage à l’ADN afin de réguler les points de contrôle du cycle cellulaire, la coordination de la réparation de l’ADN et l’apoptose via des substrats tels que p53, les phosphatases CDC25 et BRCA1. Cette voie intègre les signaux de stress génomique au contrôle de la réplication pour préserver l’intégrité du génome durant la phase S et la mitose. Une signalisation CHEK2/Chk2 dérégulée, ainsi que des variants héréditaires ou acquis, ont été associés à des phénotypes d’instabilité génomique et à une susceptibilité accrue au cancer, faisant de cette voie une cible couramment utilisée pour étudier les circuits de la réponse aux dommages de l’ADN.
Chk2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHEK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHEK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHEK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHEK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.