Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Chk2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424521
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Chk2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Chk2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Chk2 Anticuerpo (A-11): sc-17747
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Chk2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424521 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Chek2 codifica la quinasa de punto de control Chk2, una quinasa de serina/treonina activada aguas abajo de ATM en respuesta a roturas de doble cadena del ADN. Una vez fosforilada, Chk2 propaga la señalización del daño en el ADN al modular efectores como p53 y las fosfatasas CDC25, influyendo así en el control de los puntos de control del ciclo celular, la elección de la vía de reparación del ADN, la senescencia y la apoptosis. En sistemas murinos, la actividad de Chek2 se estudia habitualmente en investigaciones sobre estabilidad genómica, estrés replicativo y respuestas al daño oxidativo. La desregulación de la señalización de CHEK2/Chk2 es ampliamente relevante para defectos de la respuesta al daño del ADN asociados a malignidad y puede alterar la sensibilidad al estrés genotóxico en modelos experimentales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Chk2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chek2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chek2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chek2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Chk2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chek2 para la investigación de la señalización de Chk2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Chek2 críticos para la función de Chk2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chek2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Chk2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Chk2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chek2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Chk2 (m) y el plásmido HDR Chk2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chek2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chek2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.