Plásmido Doble Nickase (h) Chk1: sc-400223-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Chk1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Chk1 (h) y el plásmido de doble nickasa Chk1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CHEK1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Chk1 Anticuerpo (G-4): sc-8408
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Chk1 | sc-400223-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Chk1 | sc-400223-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK1 codifica la cinasa de punto de control 1 (Chk1), una cinasa de serina/treonina que coordina la respuesta al daño del ADN y la señalización del estrés replicativo para preservar la estabilidad del genoma. Activada principalmente aguas abajo de ATR, Chk1 fosforila sustratos como las fosfatasas CDC25 para restringir la actividad de las CDK, imponer los puntos de control de las fases S y G2/M, y estabilizar las horquillas de replicación detenidas. A través de estas funciones, CHEK1 integra la progresión del ciclo celular con vías de reparación del ADN, incluida la recombinación homóloga y los mecanismos de protección de la horquilla. La desregulación de la señalización de Chk1 se asocia con frecuencia con la tolerancia al estrés replicativo y la inestabilidad cromosómica observadas en múltiples tipos de cáncer, lo que la convierte en un nodo ampliamente estudiado en la biología del estrés oncogénico.
Chk1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHEK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHEK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHEK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHEK1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.