CHD5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402429-LAC

La proteina 5 con cromodominio ed attività elicasi legante il DNA (CHD5) è un rimodellatore della cromatina dipendente dall’ATP che regola il posizionamento dei nucleosomi e programmi trascrizionali legati alla differenziazione neuronale, al controllo del ciclo cellulare e alla stabilità del genoma. In quanto membro della famiglia CHD, CHD5 integra il rimodellamento della cromatina con la regolazione epigenetica per influenzare le risposte al danno del DNA e l’espressione coordinata di reti di geni oncosoppressori, incluse vie associate alla segnalazione di p53 e alla senescenza. Un’alterazione dell’espressione di CHD5 o la sua perdita genomica è stata riportata in molteplici tumori, e la disregolazione è anche collegata a processi di neurosviluppo, rendendolo un nodo utile per lo studio della regolazione genica dipendente dallo stato della cromatina. Queste caratteristiche rendono CHD5 un bersaglio modello per analizzare come il rimodellamento della cromatina plasmi l’impegno di linea e circuiti trascrizionali rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale CHD5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CHD5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CHD5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CHD5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CHD5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CHD5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.