Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHCHD3 (m): sc-425804

Présentation

Chchd3 code pour CHCHD3 (également appelé Mic19), un composant central du système d’organisation des sites de contact et des crêtes mitochondriales (MICOS), qui maintient l’architecture de la membrane interne mitochondriale et l’intégrité des jonctions des crêtes. En servant d’échafaudage aux assemblages protéiques au niveau des jonctions des crêtes et en se coordonnant avec les machineries de dynamique mitochondriale et d’import des protéines, CHCHD3 soutient l’efficacité de la phosphorylation oxydative, l’organisation de la chaîne respiratoire et le contrôle qualité mitochondrial. La perturbation des composants de MICOS, dont CHCHD3, est associée à une bioénergétique altérée, à une augmentation des espèces réactives de l’oxygène et à des effets en aval sur l’apoptose, la mitophagie et la signalisation du stress cellulaire. Ces processus sont fréquemment étudiés dans des modèles de neurodégénérescence, de dysfonction cardiométabolique et d’adaptation métabolique des cellules cancéreuses, où l’ultrastructure mitochondriale et la respiration constituent des phénotypes centraux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHCHD3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chchd3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chchd3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chchd3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHCHD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chchd3 pour l'étude de la signalisation de CHCHD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chchd3 essentiels à la fonction de CHCHD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chchd3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHCHD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CHCHD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chchd3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHCHD3 plasmide HDR (m) et le CHCHD3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chchd3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chchd3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.