CH25H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419641

Panoramica

Ch25h codifica la colesterolo 25-idrossilasi (CH25H), un enzima associato al reticolo endoplasmatico che converte il colesterolo in 25-idrossicolesterolo, un ossisterolo che modula la composizione lipidica delle membrane e il controllo trascrizionale dell’omeostasi del colesterolo. Attraverso un crosstalk con programmi regolati dagli steroli, come la segnalazione SREBP e i recettori nucleari sensibili agli ossisteroli, CH25H influenza il metabolismo lipidico, la segnalazione dell’immunità innata e l’espressione di geni infiammatori. Nei modelli murini, l’attività di Ch25h è stata collegata agli stati di attivazione dei macrofagi, alle vie di restrizione antivirale e alla regolazione delle reti di citochine. Una produzione deregolata di ossisteroli è rilevante negli studi sull’infiammazione metabolica e sul rimodellamento tissutale mediato dal sistema immunitario, in cui un’alterata gestione del colesterolo può plasmare le risposte cellulari allo stress e gli output di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CH25H (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ch25h in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ch25h insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ch25h a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CH25H.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ch25h per lo studio della segnalazione di CH25H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ch25h critici per la funzione di CH25H
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ch25h per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CH25H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CH25H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ch25h. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CH25H Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CH25H (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ch25h per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ch25h definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.