CGRP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401165-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CGRP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CGRP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und CGRP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CALCB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CGRP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401165-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CGRP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401165-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCB kodiert das Calcitonin-Gen-verwandte Peptid 2 (CGRP2), ein Neuropeptid, das durch proteolytische Prozessierung entsteht und primär über den Calcitonin-Rezeptor-ähnlichen Rezeptor (CALCRL) signalisiert, der dabei einen Komplex mit Rezeptor-Aktivitäts-modifizierenden Proteinen (RAMPs) bildet. CGRP2 aktiviert eine Gs-gekoppelte Signalübertragung, erhöht dadurch cAMP und stößt nachgeschaltete, PKA/CREB-abhängige Transkriptionsprogramme an. So beeinflusst es den vasomotorischen Tonus, neurogene Entzündung, nozizeptive Signalübertragung und die neuroimmunologische Kommunikation. In peripheren und zentralen sensorischen Bahnen koordinieren CGRP-Familienpeptide vaskuläre und immunologische Antworten auf neuronale Aktivität und modulieren die synaptische Erregbarkeit. Eine fehlregulierte CGRP-Signalgebung wird mit der Migränebiologie, entzündlichen Schmerzzuständen und der vaskulären Homöostase in Verbindung gebracht, wodurch CALCB ein relevantes Ziel für mechanistische Studien in neurovaskulären und neuroinflammatorischen Modellen ist.
CGRP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CALCB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CALCB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CALCB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CALCB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.