cGAS Lentiviral Activation Particles (h): sc-403354-LAC

Das humane MB21D1-Gen kodiert die zyklische GMP-AMP-Synthase (cGAS), einen zytosolischen DNA-Sensor, der die Synthese von 2′3′-cGAMP katalysiert, um STING (TMEM173) sowie die nachgeschaltete TBK1–IRF3- und NF-κB-Signalübertragung zu aktivieren. Dieser Signalweg koordiniert Typ-I-Interferon- und entzündliche Genprogramme als Antwort auf mikrobielle DNA, genomische Instabilität und fehlplatzierte körpereigene DNA aus Mikrokernen oder infolge mitochondrialen Stresses. Die cGAS-Signalgebung überschneidet sich mit DNA-Schadensantworten, Chromatinregulation, Autophagie und seneszenzassoziierter Entzündung und prägt so den Tonus der angeborenen Immunität in verschiedenen Geweben. Eine fehlregulierte cGAS–STING-Aktivität wird mit autoinflammatorischen Phänotypen, der Umgestaltung des Tumor-Immunmikromilieus und Neuroinflammation in Verbindung gebracht, was ihren häufigen Einsatz in mechanistischen Studien zur Nukleinsäureerkennung unterstützt.

cGAS Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MB21D1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

cGAS Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MB21D1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen cGAS-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MB21D1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.