Plasmide CRISPR d'Activation (m) cGAS: sc-437363-ACT

Le gène murin *Mb21d1* code cGAS, un capteur cytosolique de l’ADN qui catalyse la synthèse de 2′3′-cGAMP après liaison à l’ADN double brin et initie la signalisation immunitaire innée via l’axe STING–TBK1–IRF3. Cette voie déclenche des programmes d’expression de l’interféron de type I et de gènes pro-inflammatoires, et s’intègre aux réponses de restriction antivirale, de production de cytokines et de mort cellulaire immunogène. L’activité de cGAS est étroitement associée à l’instabilité génomique et à la fuite d’ADN mitochondrial, reliant les réponses aux dommages de l’ADN à la signalisation inflammatoire. Une signalisation cGAS–STING dérégulée a été impliquée dans l’auto-inflammation et contribue à des phénotypes inflammatoires dans des modèles de cancer, de neuro-inflammation et de stress métabolique, faisant de *Mb21d1* un nœud clé pour les études mécanistiques.

cGAS Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mb21d1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cGAS Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mb21d1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mb21d1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cGAS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mb21d1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cGAS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cGAS dans les cellules tumorales présentant une expression de Mb21d1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.