cGAS Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437363-ACT

O gene Mb21d1 de camundongo codifica a cGAS, um sensor citosólico de DNA que catalisa a síntese de 2′3′-cGAMP ao se ligar a DNA de dupla fita e inicia a sinalização imune inata por meio do eixo STING–TBK1–IRF3. Essa via induz programas gênicos de interferon tipo I e pró-inflamatórios e se integra a mecanismos de restrição antiviral, produção de citocinas e respostas de morte celular imunogênica. A atividade da cGAS está intimamente ligada à instabilidade genômica e ao vazamento de DNA mitocondrial, conectando respostas ao dano no DNA à sinalização inflamatória. A desregulação da sinalização cGAS–STING tem sido implicada na autoinflamação e contribui para fenótipos inflamatórios em modelos de câncer, neuroinflamação e estresse metabólico, tornando Mb21d1 um nó-chave para estudos mecanísticos.

cGAS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mb21d1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cGAS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mb21d1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mb21d1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cGAS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mb21d1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cGAS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cGAS em células tumorais com expressão de Mb21d1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.