Plasmide CRISPR/Cas9 KO CEP164 (h): sc-403550

Présentation

CEP164 (protéine centrosomale 164) est un composant des appendices distaux du centriole mère, indispensable à l’initiation du cil primaire et à l’arrimage des vésicules ciliées au corpuscule basal. Elle sert d’échafaudage pour l’assemblage des appendices distaux et favorise le recrutement des facteurs de biogenèse du cil, reliant la maturation du centrosome à la ciliogenèse et à la régulation du cycle cellulaire. Par son rôle dans le contrôle de l’axe centrosome–cil, CEP164 influence des voies de signalisation coordonnées par les cils primaires, notamment des processus dépendants de Hedgehog. La dérégulation ou les mutations de CEP164 sont associées à des phénotypes de ciliopathies, en particulier des troubles liés à la néphronophtise, ainsi qu’à des anomalies développementales plus larges liées à une fonction ciliaire altérée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CEP164 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CEP164 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CEP164, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CEP164 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CEP164.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CEP164 pour l'étude de la signalisation de CEP164, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CEP164 essentiels à la fonction de CEP164
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CEP164 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CEP164 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CEP164 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CEP164. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CEP164 plasmide HDR (h) et le CEP164 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CEP164 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CEP164 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.