CEP135 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411306-ACT

Das humane Gen **CEP135** codiert ein zentrales Zentrosomenprotein, das an den proximalen Enden der Zentriolen lokalisiert und die Zentriolenbiogenese, den Zusammenhalt sowie die strukturelle Integrität der Zentriolen während des Zellzyklus unterstützt. CEP135 wirkt in Prozessen der Zentrosomenreifung und der Mikrotubuli-Organisation mit, die den Aufbau der bipolaren Spindel und die zuverlässige Chromosomensegregation in der Mitose koordinieren. Durch seinen Einfluss auf Anzahl und Architektur der Zentrosomen ist CEP135 mit Mechanismen verknüpft, die genomische Stabilität und Zellproliferation steuern. Eine Fehlregulation zentrosomenassoziierter Signalwege unter Beteiligung von CEP135 wurde im Zusammenhang mit Entwicklungsstörungen sowie in der Krebsforschung untersucht, wo abnorme Spindeldynamik und Aneuploidie beobachtet werden.

CEP135 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CEP135-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CEP135 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CEP135-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CEP135-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CEP135-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CEP135-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CEP135-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CEP135-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CEP135-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.