Plasmide CRISPR/Cas9 KO Centrin-2 (h): sc-400867

Présentation

CETN2 code la centrine-2, une protéine conservée de liaison au calcium de type EF-hand, localisée aux centrosomes et aux corps basaux, et qui contribue à la duplication des centrioles, à l’intégrité du centrosome et à l’organisation du fuseau mitotique pendant la division cellulaire. La centrine-2 participe également à l’assemblage et au fonctionnement du cil primaire, reliant l’activité de CETN2 au contrôle du cycle cellulaire et à des processus dépendants des microtubules tels que la ciliogenèse. Par ses rôles dans l’homéostasie du centrosome et les réseaux de signalisation ciliaire, une dynamique altérée de la centrine-2 peut influencer la stabilité génomique et les programmes de différenciation cellulaire, fréquemment perturbés dans le cancer et dans la biologie liée aux ciliopathies. CETN2 est donc largement utilisé comme outil moléculaire pour explorer les voies associées au centrosome, la fidélité de la mitose et les sorties de signalisation dépendantes des cils dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Centrin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CETN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CETN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CETN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Centrin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CETN2 pour l'étude de la signalisation de Centrin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CETN2 essentiels à la fonction de Centrin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CETN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Centrin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Centrin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CETN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Centrin-2 plasmide HDR (h) et le Centrin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CETN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CETN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.