CENP-S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417249

Übersicht

CENPS kodiert das Zentromerprotein S (CENP‑S), eine konservierte Komponente des konstitutiven zentromerassoziierten Netzwerks, das die Integrität des Kinetochors und die korrekte Chromosomensegregation unterstützt. CENP‑S ist an der Assemblierung von Zentromer und Kinetochor beteiligt und trägt zur Genomstabilität bei, indem es einen ordnungsgemäßen Ablauf der Mitose fördert. Störungen von Zentromer- und Kinetochorwegen sind eng mit chromosomaler Instabilität und Aneuploidie verknüpft – Prozesse, die häufig im Kontext der Krebsbiologie und proliferativen Stresses untersucht werden. CENP‑S wird außerdem an der Schnittstelle zwischen replikationsassoziierten DNA-Schadensantworten und mitotischer Genauigkeit untersucht, da Defekte Zellen gegenüber genotoxischen Belastungen sensibilisieren können.

Das CENP-S CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CENPS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CENPS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CENPS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CENP-S-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CENPS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CENP-S-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CENPS-Exone abzielen, die für die CENP-S-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CENPS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CENP-S CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CENP-S CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CENPS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CENP-S HDR-Plasmid (h) und CENP-S HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CENPS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CENPS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.