Plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-B (h): sc-401356

Présentation

CENPB code la protéine centromérique B (CENP‑B), un facteur de liaison à l’ADN spécifique de séquence qui reconnaît la CENP‑B box au sein des répétitions α‑satellites et contribue à l’organisation de la chromatine centromérique. CENP‑B participe à l’assemblage du kinétochore et à la ségrégation des chromosomes en soutenant l’architecture du centromère et l’organisation de l’hétérochromatine d’ordre supérieur pendant la mitose. Par ses rôles dans le maintien du centromère et la progression du cycle cellulaire, une altération de la fonction de CENPB ou une dérégulation du centromère est liée à des phénotypes d’instabilité génomique, notamment l’aneuploïdie et des aberrations chromosomiques observées dans divers cancers. CENP‑B est également un auto-antigène bien établi dans les réponses en anticorps anti-centromère, reliant ainsi la biologie du centromère à des phénotypes cellulaires associés à l’auto-immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CENPB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CENPB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CENPB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CENP-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CENPB pour l'étude de la signalisation de CENP-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CENPB essentiels à la fonction de CENP-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CENPB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CENP-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CENP-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CENPB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CENP-B plasmide HDR (h) et le CENP-B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CENPB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CENPB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.