Plasmide Double Nickase (h) CEACAM5: sc-401219-NIC

CEACAM5 (carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5, CD66e) est une glycoprotéine de la superfamille des immunoglobulines, ancrée à la membrane via un GPI, qui médie l’adhérence cellule–cellule et participe à l’organisation épithéliale ainsi qu’à l’architecture tissulaire. Elle influence des événements de signalisation liés à la polarité cellulaire, à la différenciation et au contrôle de la croissance dépendant des contacts, et peut moduler les interactions entre les cellules tumorales et le microenvironnement. CEACAM5 est largement étudiée comme marqueur de lignée épithéliale et se trouve fréquemment dérégulée dans les carcinomes gastro-intestinaux et d’autres carcinomes, où une expression altérée est corrélée à des phénotypes de progression tumorale. Sa biologie s’entrecroise avec des voies régissant la dynamique de l’adhérence, la reconnaissance immunitaire aux surfaces muqueuses et les processus de dissémination métastatique.

CEACAM5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CEACAM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CEACAM5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CEACAM5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CEACAM5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.