Cdx2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419618-ACT

Cdx2 (caudal type homeobox 2) kodiert einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Embryogenese die posteriore Körpermusterbildung etabliert und aufrechterhält und bei der Maus ein zentraler Regulator der Trophektoderm-Spezifikation sowie der Differenzierung des intestinalen Epithels ist. Durch die Bindung an sequenzspezifische DNA-Motive koordiniert CDX2 transkriptionelle Programme, die mit der Wnt/β‑Catenin-Signalgebung, epithelialer Polarität und Zelllinienfestlegung verknüpft sind und so Proliferation und Reifung des Darmepithels beeinflussen. Eine fehlregulierte CDX2-Expression wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und einer aberranten epithelialen Identität in Verbindung gebracht, weshalb CDX2 in Studien zu Entwicklungsstörungen und zur Biologie gastrointestinaler Erkrankungen häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt eingesetzt wird. In vitro wird Cdx2 oft genutzt, um Schicksalsübergänge, die Reifung von Organoiden und die Dynamik transkriptioneller Netzwerke in Stamm- und Vorläuferzellsystemen zu modellieren.

Cdx2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cdx2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cdx2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cdx2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cdx2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cdx2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cdx2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cdx2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cdx2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cdx2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.