Plásmido CRISPR de Activación (m) Cdx2: sc-419618-ACT

Cdx2 (homeobox caudal tipo 2) codifica un factor de transcripción homeobox que establece y mantiene el patrón corporal posterior durante la embriogénesis y es un regulador clave de la especificación del trofoectodermo y de la diferenciación del epitelio intestinal en el ratón. Al unirse a motivos de ADN específicos de secuencia, CDX2 coordina programas transcripcionales que se interconectan con la señalización Wnt/β-catenina, la polaridad epitelial y el compromiso de linaje, influyendo en la proliferación y la maduración del epitelio intestinal. La expresión desregulada de CDX2 se ha asociado con estados de diferenciación alterados y una identidad epitelial aberrante, por lo que se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico en estudios de trastornos del desarrollo y de la biología de enfermedades gastrointestinales. In vitro, Cdx2 se emplea con frecuencia para modelar transiciones de destino celular, la maduración de organoides y la dinámica de redes transcripcionales en sistemas de células madre y progenitoras.

Cdx2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cdx2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdx2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cdx2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cdx2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdx2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cdx2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdx2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdx2 en células tumorales con expresión de Cdx2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.