CDw75/ST6GAL1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402881-LAC

ST6GAL1 kodiert die Beta-Galaktosid-α-2,6-Sialyltransferase 1 (CDw75), ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das die Addition von α2,6-verknüpfter Sialinsäure an terminale Galaktosereste auf N-Glykanen von Glykoproteinen und Glykolipiden katalysiert. Durch die Prägung von Glykosylierungsmustern an der Zelloberfläche beeinflusst ST6GAL1 die Proteinstabilität, die Clusterbildung von Rezeptoren und die Ligandenerkennung und ist damit in Prozesse wie Immunzell-Signalübertragung, Adhäsion und Zellverkehr (Trafficking) eingebunden. Eine veränderte ST6GAL1-Aktivität wird häufig im Kontext der krebsassoziierten Umgestaltung von Glykanen, der Immunflucht und metastasebezogener Phänotypen sowie inflammatorischer Signalwege und der Differenzierung hämatologischer Zellen untersucht. Seine Rolle bei der Modulation sialylierungsabhängiger Signalwege macht es zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung glyko-regulatorischer Mechanismen in unterschiedlichsten Zelltypen.

CDw75/ST6GAL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ST6GAL1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CDw75/ST6GAL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ST6GAL1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CDw75/ST6GAL1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ST6GAL1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.