CDw75/ST6GAL1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402881-NIC

ST6GAL1 (CDw75) kodiert die β-Galaktosid-α-2,6-Sialyltransferase 1, ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das die terminale α2,6-Sialylierung N‑verknüpfter Glykanstrukturen auf membranständigen und sekretierten Glykoproteinen katalysiert. Diese Modifikation beeinflusst die Faltung von Glykoproteinen, die Stabilität von Rezeptoren und die Ligandenerkennung und wirkt sich über veränderte, glykanabhängige Bindungsereignisse auf Zell‑Zell‑Interaktionen, Immunmodulation und Signaltransduktion aus. Die ST6GAL1-Aktivität trägt zur Regulation der Oberflächen‑Glykome von B‑Zellen und Epithelzellen bei und beeinflusst Prozesse wie Adhäsion, Migration und Apoptose. Eine dysregulierte ST6GAL1-Expression und veränderte α2,6‑Sialylierungsmuster werden mit verändertem Tumorzellverhalten, Entzündung und einer erhöhten Anfälligkeit für Infektionen in Verbindung gebracht, was ST6GAL1 zu einem wichtigen Knotenpunkt für die Glykobiologie und die Erforschung von Krankheitsmechanismen macht.

CDw75/ST6GAL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ST6GAL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ST6GAL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ST6GAL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ST6GAL1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.