CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419611
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CDKN2B/p15 INK4B Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CDKN2B/p15 INK4B-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PCLAF: sc-390515
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419611 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Cdkn2b kodiert CDKN2B/p15^INK4B, einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor, der die Aktivität von CDK4/6 hemmt und so die RB‑abhängige Kontrolle des G1/S‑Checkpoints aufrechterhält. Als zentraler Effektor nachgeschaltet an antiproliferative Signale wie die TGF‑β‑Signalgebung trägt p15 zur Koordination von Zellzyklusarrest, Programmen der Linien-/Differenzierungsfestlegung sowie Antworten auf onkogenen Stress bei. Eine Störung oder epigenetische Stilllegung von Cdkn2b ist häufig mit dereguliertem Wachstum verbunden und wird im Kontext von Tumorsuppressor-Netzwerken sowie Modellen der hämatopoetischen und epithelialen Transformation untersucht. Die Funktion von Cdkn2b wird häufig zusammen mit dem CDKN2A/B‑Lokus, der CDK4/6–RB–E2F‑Achse und seneszenzassoziierten Signalwegen analysiert.
Das CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cdkn2b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cdkn2b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cdkn2b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CDKN2B/p15 INK4B-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cdkn2b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CDKN2B/p15 INK4B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Cdkn2b-Exone abzielen, die für die CDKN2B/p15 INK4B-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cdkn2b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cdkn2b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CDKN2B/p15 INK4B HDR-Plasmid (m) und CDKN2B/p15 INK4B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cdkn2b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cdkn2b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.