CDKN2B/p15 INK4B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400570-KO-2

Descripción general

CDKN2B codifica p15 INK4B, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclinas que se une a CDK4/6 para frenar la fosforilación de RB dependiente de ciclina D y hacer cumplir el punto de control G1/S. Su expresión suele inducirse por señales antiproliferativas como la vía de TGF-β, lo que vincula el estrés extracelular y los programas de diferenciación con la detención del ciclo celular y la senescencia. CDKN2B se encuentra en el locus 9p21, una región genómica alterada con frecuencia en cáncer e implicada en la susceptibilidad a diversos rasgos relacionados con el envejecimiento y cardiometabólicos. La desregulación del control de CDK4/6 mediado por p15 INK4B contribuye a una proliferación aberrante, cambios en el compromiso de linaje y el escape de las vías inhibidoras del crecimiento.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CDKN2B/p15 INK4B (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDKN2B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDKN2B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDKN2B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CDKN2B/p15 INK4B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDKN2B para la investigación de la señalización de CDKN2B/p15 INK4B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDKN2B críticos para la función de CDKN2B/p15 INK4B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDKN2B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDKN2B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CDKN2B/p15 INK4B (h) y el plásmido HDR CDKN2B/p15 INK4B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDKN2B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDKN2B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.