CDKN2A/p16 Double Nickase Plasmid (m): sc-419610-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CDKN2A/p16 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CDKN2A/p16 Double-Nickase-Plasmid (m) und CDKN2A/p16 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cdkn2a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CDKN2A/p19ARF: sc-32748
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDKN2A/p16 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDKN2A/p16 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Cdkn2a-Gen kodiert CDKN2A/p16, einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor, der die Aktivität von CDK4/6 hemmt und dazu beiträgt, die RB-abhängige Kontrolle des G1/S-Zellzyklus-Checkpoints aufrechtzuerhalten. Indem p16 die Phosphorylierung von Proteinen der RB-Familie begrenzt, koordiniert es Programme des proliferativen Arrests und ist mit seneszenzassoziierter Signalgebung als Antwort auf onkogenen Stress und Gewebeschädigung verknüpft. Die Regulation von Cdkn2a ist eng an Signalwege gekoppelt, die zelluläres Altern, die Proliferation von Stamm- und Vorläuferzellen sowie die Integrität von Checkpoints steuern. Eine veränderte Expression oder Funktion von Cdkn2a/p16 wird in Mausmodellen häufig als molekularer Readout für Seneszenz, die Aktivierung von Tumorsuppressorwegen und eine Dysregulation des Zellzyklus verwendet.
CDKN2A/p16 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cdkn2a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cdkn2a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cdkn2a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cdkn2a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.