Plasmide Double Nickase (h) CDKN1B/Kip1 p27: sc-400074-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CDKN1B/Kip1 p27 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CDKN1B/Kip1 p27 Double Nickase (h) et le plasmide CDKN1B/Kip1 p27 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDKN1B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CDKN1B/Kip1 p27 Antibody (F-8): sc-1641
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CDKN1B/Kip1 p27 | sc-400074-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CDKN1B/Kip1 p27 | sc-400074-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN1B code pour p27Kip1, un inhibiteur de kinases dépendantes des cyclines (CDK) qui freine la progression à travers le point de contrôle G1/S pilotée par CDK2 et CDK4/6 en modulant les complexes cycline E/A–CDK2 et cycline D–CDK4/6. p27 intègre les signaux mitogènes et les signaux inhibiteurs de croissance pour contrôler l’arrêt du cycle cellulaire, la quiescence cellulaire et la différenciation ; sa régulation dépend d’une localisation subcellulaire gouvernée par la phosphorylation et d’un renouvellement par le protéasome via des ligases ubiquitine SCF. Une expression ou une stabilité altérée de CDKN1B est fréquemment associée à une prolifération dérégulée et à un contrôle aberrant des points de contrôle, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude de la signalisation oncogénique, de l’engagement de lignée et des réponses au stress dans les cellules humaines.
CDKN1B/Kip1 p27 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN1B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.