Cdk8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435217
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk8 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Cdk8, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk8 Antibody (D-9): sc-13155
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-435217 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La chinasi ciclina-dipendente 8 (Cdk8) è una chinasi serina/treonina associata al complesso Mediator che regola la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II fosforilando fattori di trascrizione e componenti del macchinario trascrizionale. Nelle cellule di topo, Cdk8 integra segnali provenienti da vie come Wnt/β-catenina, TGF-β/SMAD e MAPK per modulare la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e l’espressione genica in risposta allo stress. Attraverso il controllo dell’attività di enhancer e promotori, Cdk8 influenza gli output trascrizionali metabolici e infiammatori e può modellare reti trascrizionali specifiche di linea cellulare. Un’attività di CDK8 deregolata è stata collegata a un’alterata regolazione trascrizionale in contesti oncogenici e dello sviluppo, rendendo Cdk8 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul controllo della trascrizione e sul cross-talk tra vie di segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdk8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdk8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdk8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdk8.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdk8 per lo studio della segnalazione di Cdk8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Cdk8 critici per la funzione di Cdk8
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdk8 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Cdk8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Cdk8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdk8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Cdk8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Cdk8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdk8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdk8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.