CDK5RAP3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408965-LAC

CDK5RAP3 (nota anche come C53) è una proteina citoplasmatica e perinucleare multifunzionale implicata nella regolazione della progressione del ciclo cellulare, della segnalazione adattativa allo stress e dell’omeostasi proteica. È stata collegata alla modulazione di vie guidate da chinasi, di processi dipendenti dall’ubiquitina e del controllo di qualità associato al reticolo endoplasmatico, mettendola in relazione con le risposte cellulari allo stress proteotossico e metabolico. Attraverso questi ruoli, CDK5RAP3 viene studiata in contesti in cui proliferazione, apoptosi e programmi adattativi allo stress vengono rimodellati, inclusi la segnalazione oncogenica e fenotipi associati all’infiammazione. Alterazioni dell’espressione di CDK5RAP3 sono state riportate in molteplici tipi di tumore, stimolando ricerche meccanicistiche su come influenzi il controllo della crescita e il crosstalk tra vie di segnalazione nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CDK5RAP3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CDK5RAP3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CDK5RAP3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CDK5RAP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CDK5RAP3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CDK5RAP3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.