CDK5RAP3 Double Nickase Plasmid (h): sc-408965-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CDK5RAP3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CDK5RAP3 Double-Nickase-Plasmid (h) und CDK5RAP3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK5RAP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CDK5RAP3: sc-271776
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDK5RAP3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408965-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDK5RAP3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408965-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK5RAP3 (auch bekannt als C53/LZAP) ist ein multifunktionelles Adapterprotein, das an der Regulation des Zellzyklusfortschritts, von Stressantworten und der intrazellulären Signalübertragung beteiligt ist. Es wurde mit der Modulation der NF-κB-Signalgebung sowie mit Interaktionen mit ubiquitinabhängigen Proteinqualitätskontrollwegen in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch transkriptionelle Outputs und die Proteostase. CDK5RAP3 trägt außerdem zur Homöostase des endoplasmatischen Retikulums und zu autophagiebezogenen Prozessen bei und verknüpft so zelluläre Stresswahrnehmung mit der Kontrolle von Wachstum. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von CDK5RAP3 wurde mit veränderten Phänotypen hinsichtlich Proliferation und Überleben assoziiert, wie sie in der Krebsbiologie und in entzündungsbezogenen Forschungskontexten beschrieben werden.
CDK5RAP3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK5RAP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK5RAP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK5RAP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK5RAP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.