CDK5RAP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407278-NIC

CDK5RAP1（CDK5 regulatory subunit–associated protein 1）は、tRNA修飾を介した転写後調節に関与するミトコンドリア酵素であり、ミトコンドリア翻訳および酸化的リン酸化を効率的に進めるうえで重要な役割を担っています。ミトコンドリアにおけるタンパク質合成の健全性を調節することで、CDK5RAP1は細胞のエネルギー代謝（バイオエネルゲティクス）、レドックス恒常性、ならびにストレス適応経路に影響を及ぼします。CDK5RAP1機能の破綻はミトコンドリア恒常性の変化と関連づけられており、がんや神経変性など、代謝リモデリングとミトコンドリア機能障害が疾患病態に寄与する文脈で研究されています。ミトコンドリア関連の制御因子として、CDK5RAP1は、ミトコンドリア遺伝子発現がストレス下での細胞状態や生存にどのように影響するかを解析するための、扱いやすい標的（ノード）となります。

CDK5RAP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDK5RAP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDK5RAP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDK5RAP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDK5RAP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。