Particules Lentivirales d'Activation (m) Cdk5: sc-419602-LAC

La kinase 5 dépendante des cyclines (Cdk5) est une kinase sérine/thréonine dirigée vers la proline qui, contrairement aux CDK du cycle cellulaire, est principalement activée par p35/p39 et agit dans des cellules post-mitotiques. Dans les systèmes murins, elle coordonne le développement neuronal, le trafic des vésicules synaptiques, la dynamique du cytosquelette et la signalisation dépendante de l’activité via la phosphorylation de substrats impliqués dans la stabilité des microtubules et le guidage axonal. Cdk5 s’inscrit à l’interface de voies régulant la signalisation calcique, la neurotransmission dopaminergique et glutamatergique, ainsi que des réseaux de kinases sensibles au stress qui influencent la survie et la plasticité neuronales. Une activité dérégulée de Cdk5 a été associée à des phénotypes neurodégénératifs et neuro-inflammatoires, à des événements de phosphorylation aberrants et à des altérations du fonctionnement des circuits, en lien avec des modèles de maladie d’Alzheimer, de maladie de Parkinson, d’épilepsie et de douleur neuropathique.

Les particules d'activation lentivirales Cdk5 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cdk5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Cdk5 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cdk5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Cdk5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cdk5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.