Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Cdk4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400148
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Cdk4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Cdk4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdk4 Anticuerpo (DCS-35): sc-23896
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Cdk4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400148 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CDK4 codifica la quinasa dependiente de ciclina 4 (Cdk4), un regulador central de la fase G1 que se asocia con ciclinas de tipo D para fosforilar proteínas de la familia RB y promover la transcripción dependiente de E2F necesaria para la entrada en la fase S. La actividad de Cdk4 está controlada por señales mitogénicas y por inhibidores de CDK como CDKN2A/p16, integrando entradas de las vías MAPK/ERK y PI3K–AKT en el compromiso con el ciclo celular. La desregulación del eje CDK4–ciclina D–RB se asocia con frecuencia a proliferación aberrante y a un control alterado de los puntos de control en contextos tanto de biología tumoral como del desarrollo. Como quinasa nodal del ciclo celular, CDK4 se estudia de manera habitual por sus funciones en proliferación, senescencia, especificación de linaje y respuestas al estrés.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cdk4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDK4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDK4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDK4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cdk4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDK4 para la investigación de la señalización de Cdk4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CDK4 críticos para la función de Cdk4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDK4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Cdk4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cdk4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDK4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cdk4 (h) y el plásmido HDR Cdk4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDK4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDK4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.