CDK11 Double Nickase Plasmid (h): sc-405330-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CDK11 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CDK11 Double-Nickase-Plasmid (h) und CDK11 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK19 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdk11: sc-517026
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDK11 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405330-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDK11 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405330-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CDK19 kodiert eine cyclinabhängige Kinase, die im Mediator-Kinasemodul wirkt und Signaleingänge mit der RNA-Polymerase-II-abhängigen Transkription verknüpft. Durch die Phosphorylierung von Transkriptionsregulatoren und die Beeinflussung der Freisetzung aus dem promotorproximalen Pausieren trägt CDK19 zur Steuerung von Genexpressionsprogrammen bei, die mit Zellzyklusprogression, Stressantworten und Differenzierung verbunden sind. Eine veränderte Aktivität oder Expression von Mediator-assoziierten CDKs wurde mit einer transkriptionellen Umprogrammierung bei Krebs und anderen proliferativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was CDK19 zu einem relevanten Ziel für die Analyse onkogener und inflammatorischer Signalnetzwerke macht. Mitglieder der CDK11-Proteinfamilie sind in ähnlicher Weise an Transkriptions- und zellzyklusbezogenen Prozessen beteiligt, was die übergreifende Bedeutung der CDK-regulierten Kontrolle der Transkription in der menschlichen Biologie unterstreicht.
CDK11 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK19-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK19 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK19-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK19-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.