Cdc5L Double Nickase Plasmid (h): sc-404611-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdc5L Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdc5L Double-Nickase-Plasmid (h) und Cdc5L Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDC5L abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdc5L: sc-398280
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdc5L Double Nickase Plasmid (h) | sc-404611-NIC | 20 µg | $410.00 |
CDC5L kodiert Cdc5L, ein konserviertes nukleäres Protein, das als Kernbestandteil des Prp19-assoziierten Komplexes fungiert, der für die Aktivierung des Spleißosoms und das Spleißen von prä-mRNA erforderlich ist. Cdc5L unterstützt die korrekte Exon-Intron-Verarbeitung und koordiniert diese mit der Zellzykluskontrolle, indem es den mitotischen Fortschritt fördert und so den RNA-Stoffwechsel mit Checkpoint- sowie DNA-Schadensantwort-Signalwegen verknüpft. Über diese Funktionen beeinflusst CDC5L die Genauigkeit des Transkriptoms und die Stabilität des Genoms – Prozesse, die bei proliferativen Erkrankungen und Krebs häufig gestört sind. Eine veränderte CDC5L-Aktivität wurde mit dysregulierten Spleißprogrammen und aberranter Zellzyklusdynamik in Verbindung gebracht, wodurch es ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu RNA-Verarbeitung-getriebenen Phänotypen darstellt.
Cdc5L Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDC5L-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDC5L abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDC5L-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDC5L-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.