Cdc25A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400345

Übersicht

CDC25A kodiert die humane dualspezifische Phosphatase Cdc25A, einen zentralen Aktivator cyclinabhängiger Kinasen (CDKs), der den Zellzyklus vorantreibt, indem er inhibitorische CDK-Phosphorylierungen am G1/S-Übergang und beim Eintritt in die S-Phase entfernt. Seine Aktivität wird durch Checkpoint-Signale streng kontrolliert, darunter ATR/ATM–CHK1/CHK2-Signalwege, die die Stabilität von CDC25A als Antwort auf Replikationsstress und DNA-Schäden regulieren. Durch die Kopplung proliferativer Signale an die Überwachung der Genomintegrität beeinflusst Cdc25A das Timing der DNA-Replikation, die Erholung nach Checkpoint-Aktivierung und die mitotische Kompetenz. Eine fehlregulierte CDC25A-Expression oder ein gestörter Abbau wurde mit aberranter Proliferation und genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, weshalb CDC25A häufig im Fokus von Studien zu onkogenem Signaling, Checkpoint-Defekten und zellzyklusgetriebenen Krankheitsmechanismen steht.

Das Cdc25A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDC25A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDC25A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDC25A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cdc25A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDC25A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cdc25A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDC25A-Exone abzielen, die für die Cdc25A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDC25A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cdc25A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cdc25A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDC25A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cdc25A HDR-Plasmid (h) und Cdc25A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDC25A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDC25A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.