Cdc20B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406774

Übersicht

CDC20B (Cell Division Cycle 20B) kodiert ein Cdc20-ähnliches Protein, dem eine Beteiligung an der zellzyklusassoziierten Regulation zugeschrieben wird. Aufgrund von Sequenzähnlichkeiten zu APC/C-Koaktivatoren wird angenommen, dass es die ubiquitinvermittelte Proteolyse während der Mitose mitsteuert. Obwohl CDC20B weniger gut charakterisiert ist als CDC20, wurden seine Expression und sein genomischer Kontext in ausgewählten Geweben mit proliferativen Programmen und Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht, was auf Funktionen bei der Kontrolle von Übergängen hindeutet, die das Timing des Zellzyklus mit zellulärem Umbau koppeln. Eine Störung von CDC20B kann daher Signalwege beeinflussen, die Checkpoint-Kontrolle, chromosomale Stabilität und den regulierten Proteinabbau betreffen. Diese Prozesse sind bei Krebs und anderen Erkrankungen mit fehlregulierter Proliferation häufig verändert, wodurch CDC20B ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Wachstumskontrolle darstellt.

Das Cdc20B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDC20B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDC20B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDC20B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cdc20B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDC20B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cdc20B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDC20B-Exone abzielen, die für die Cdc20B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDC20B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cdc20B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cdc20B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDC20B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cdc20B HDR-Plasmid (h) und Cdc20B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDC20B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDC20B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.