Plásmido CRISPR de Activación (h) CD92: sc-408392-ACT

SLC44A1 codifica CD92, una proteína de membrana tipo transportador de colina que contribuye a la captación celular de colina y al metabolismo de fosfolípidos, respaldando la biogénesis de membranas y las demandas de señalización en células en proliferación. Al influir en la disponibilidad de colina, CD92 se vincula con vías que regulan la síntesis de fosfatidilcolina, la homeostasis de las membranas de los orgánulos y respuestas más amplias al estrés asociado a lípidos. La expresión o regulación alteradas de componentes del transporte de colina se han asociado con la remodelación metabólica observada en la biología del cáncer y con alteraciones en contextos neuroinmunes e inflamatorios, lo que convierte a SLC44A1 en un nodo útil para estudios mecanísticos del metabolismo de lípidos de membrana. La localización de CD92 y su actividad de transporte también proporcionan una lectura accesible para investigar cómo el transporte de nutrientes se integra con programas de crecimiento y diferenciación celular.

CD92 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC44A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD92 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC44A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC44A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD92. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC44A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD92 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD92 en células tumorales con expresión de SLC44A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.