Plasmide Double Nickase (h) CD9: sc-400252-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD9 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD9 Double Nickase (h) et le plasmide CD9 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD9 Antibody (C-4): sc-13118
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD9 | sc-400252-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD9 | sc-400252-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD9 est une protéine de surface cellulaire de la famille des tétraspanines qui organise des microdomaines membranaires en s’associant à des intégrines, à des récepteurs de la superfamille des immunoglobulines et à d’autres tétraspanines, afin de coordonner l’adhésion, la motilité et les événements de fusion membranaire. Dans les cellules humaines, CD9 contribue à l’endocytose et au trafic vésiculaire, et module des sorties de signalisation liées au remodelage du cytosquelette, notamment des voies influençant la migration cellulaire et les interactions avec la matrice extracellulaire. CD9 est également enrichie dans les vésicules extracellulaires et est largement utilisée comme marqueur d’exosomes, ce qui soutient les études sur la communication intercellulaire et la biogenèse des vésicules. Des altérations de l’expression et de la localisation de CD9 ont été associées à une invasion dérégulée, à des interactions avec les cellules immunitaires et à un comportement métastatique dans plusieurs contextes cancéreux, ce qui en fait une cible pertinente pour des modèles mécanistiques de maladie.
CD9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.