Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CD88 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419395
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD88 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD88, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD88 Anticuerpo (R63): sc-53797
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD88 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419395 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
C5ar1 codifica CD88, el receptor canónico acoplado a proteína G para la anafilotoxina del complemento C5a, y se expresa en altos niveles en células de la línea mieloide, incluidos neutrófilos, monocitos y macrófagos. Tras la unión del ligando, CD88 activa una señalización dependiente de Gi que impulsa la quimiotaxis, la movilización de calcio, las vías MAPK y PI3K, el estallido oxidativo y la producción de citocinas, integrando las señales del complemento con la activación de la inmunidad innata. Este receptor participa en la amplificación de la inflamación y el reclutamiento de leucocitos, y converge con la señalización de los receptores Fc y con las vías de reconocimiento de patrones para moldear las respuestas de daño y reparación tisular. La señalización C5a–CD88 desregulada se ha implicado en modelos de sepsis, inflamación autoinmune, lesión por isquemia-reperfusión y neuroinflamación, lo que convierte a C5ar1 en un nodo útil para estudios mecanísticos en inmunopatología.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD88 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C5ar1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C5ar1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C5ar1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD88.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C5ar1 para la investigación de la señalización de CD88, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de C5ar1 críticos para la función de CD88
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C5ar1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD88 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD88 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C5ar1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD88 (m) y el plásmido HDR CD88 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C5ar1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C5ar1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.