CD8-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400372

Übersicht

CD8A kodiert CD8-α, ein Typ-I-Membranglykoprotein, das auf T-Zellen und einer Untergruppe von NK-Zellen entweder CD8αα-Homodimere oder CD8αβ-Heterodimere bildet und als Korezeptor für die MHC‑Klasse‑I‑restriktierte Antigenerkennung dient. Durch die Bindung an MHC I und die Assoziation mit LCK fördert CD8‑α die TCR-Signalübertragung, die Ausbildung der immunologischen Synapse sowie nachgeschaltete Signalwege, die die Differenzierung zytotoxischer Effektorzellen und die Zytokinproduktion steuern. Die CD8A-Expression wird häufig genutzt, um zytotoxische Lymphozytenzustände zu definieren und Programme der Linienspezifizierung, Aktivierung und Erschöpfung zu untersuchen. Eine Fehlregulation der CD8‑α‑abhängigen Signalgebung und der CD8+‑T‑Zell-Phänotypen ist relevant für Forschungsfragen zu Tumor-Mikroumgebungen des Immunsystems, chronischen Virusinfektionen, Autoimmunität und Immundefekten.

Das CD8-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CD8A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CD8A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CD8A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD8-α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CD8A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD8-α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CD8A-Exone abzielen, die für die CD8-α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CD8A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD8-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CD8-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CD8A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD8-α HDR-Plasmid (h) und CD8-α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CD8A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CD8A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.