Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD74: sc-400279-ACT

Le gène humain CD74 code la chaîne invariante (Ii), une protéine transmembranaire de type II qui chaperonne les hétérodimères α/β du CMH de classe II dans le réticulum endoplasmique, régule leur trafic à travers les compartiments endosomaux et subit un traitement protéolytique générant le peptide CLIP pour le chargement des antigènes. En contrôlant le traitement et la présentation des antigènes, CD74 influence l’activation de l’immunité adaptative et l’amorçage des lymphocytes T spécifiques d’antigène ; il participe également à la signalisation intracellulaire dans les cellules présentatrices d’antigènes via des interactions avec des récepteurs de surface tels que le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF). L’expression de CD74 est marquée dans les lymphocytes B, les cellules dendritiques et d’autres cellules présentatrices d’antigènes professionnelles, ce qui le relie à des voies impliquées dans la protéostasie endolysosomale, la surveillance immunitaire et les réponses inflammatoires. Une dysrégulation de CD74 a été associée à des pathologies à médiation immune et fait l’objet d’études fréquentes dans les contextes des hémopathies malignes et du microenvironnement tumoral, où la présentation d’antigènes et la signalisation immunitaire sont altérées.

CD74 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD74 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD74 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD74 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD74, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD74. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD74 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD74 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD74 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD74 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.