CD73 Double Nickase Plasmid (m): sc-423919-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD73 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD73 Double-Nickase-Plasmid (m) und CD73 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nt5e abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD73 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD73 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-*Nt5e* kodiert CD73 (Ecto-5′-Nukleotidase), ein GPI-verankertes Ectoenzym, das die Dephosphorylierung von extrazellulärem AMP zu Adenosin katalysiert und damit die purinerge Signalübertragung sowie den Nukleotidstoffwechsel im Gewebemikromilieu prägt. Durch die Steuerung der lokalen Adenosinverfügbarkeit beeinflusst CD73 cAMP-gekoppelte Signalwege, Aktivierungszustände von Immunzellen, die Biologie der Endothelbarriere und hypoxieassoziierte Reaktionen. Die CD73-Aktivität ist Teil der ATP–Adenosin-Achse und wirkt zusammen mit CD39 und Adenosinrezeptoren an der Regulation von Entzündung, vaskulärem Remodeling und metabolischer Anpassung mit. Eine fehlregulierte CD73-Expression oder -Aktivität ist in Modellen chronischer Entzündung, ischämischer Schädigung, Fibrose und tumorassoziierter Immunsuppression beschrieben, was ihre Relevanz für mechanistische Studien unterstreicht.
CD73 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nt5e-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nt5e abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nt5e-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nt5e-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.