CD73 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423919-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD73 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD73ダブルニカースプラスミド（m）およびCD73ダブルニカースプラスミド（m2）は、Nt5eを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD73 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD73 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのNt5eはCD73（ecto-5′-ヌクレオチダーゼ）をコードしており、細胞膜にGPIアンカーで結合した細胞外酵素として、細胞外AMPを脱リン酸化してアデノシンに変換します。これにより、組織微小環境におけるプリン作動性シグナル伝達およびヌクレオチド代謝が調節されます。局所のアデノシン利用可能性を制御することで、CD73はcAMPに連関したシグナル、免疫細胞の活性化状態、内皮バリア機能、ならびに低酸素に関連する応答に影響を及ぼします。CD73の活性は、CD39およびアデノシン受容体とともにATP–アデノシン軸の一部として機能し、炎症、血管リモデリング、代謝適応を調節します。CD73の発現や活性の異常は、慢性炎症、虚血性障害、線維化、腫瘍関連免疫抑制のモデルで関与が示されており、機序解明研究における重要性を裏づけています。
CD73 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nt5e 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nt5e内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nt5eの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nt5eが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。