Partículas Lentivirales de Activación (h2) CD69: sc-416315-LAC-2

El CD69 humano codifica la proteína CD69, un receptor de lectina tipo C transmembrana de tipo II que se induce rápidamente en células T, células B, células NK y otros leucocitos activados, donde actúa como un marcador temprano de activación y modulador de la señalización inmunitaria. CD69 influye en el tráfico y la retención tisular de los linfocitos mediante la regulación del receptor 1 de esfingosina-1-fosfato (S1PR1) y contribuye a programas posteriores que afectan la producción de citocinas, la proliferación y la dinámica de la sinapsis inmunológica. Por sus funciones en la activación inmunitaria, la inmunidad mucosa y de células residentes en tejidos, y las redes de señalización inflamatoria, CD69 se asocia con la desregulación inmunitaria observada en autoinmunidad, inflamación crónica, infección y microambientes inmunitarios tumorales. La edición génica o la perturbación funcional de CD69 en células humanas respalda estudios mecanísticos de circuitos transcripcionales dependientes de la activación, el control de la migración/salida y la fenotipificación de células inmunitarias en modelos de investigación in vitro y ex vivo.

Las partículas de activación lentiviral CD69 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CD69 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CD69 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CD69, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CD69. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CD69 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.