Plásmido Doble Nickase (h) CD69: sc-416315-NIC

CD69 codifica un antígeno de activación temprana que se expresa en la superficie de células T, células B, células NK y otros leucocitos, donde actúa como un receptor de lectina tipo C que marca rápidamente la activación inmunitaria. CD69 participa en programas de señalización e interacción célula–célula que determinan la retención y migración de los linfocitos, incluida la modulación de la salida dependiente del receptor de esfingosina-1-fosfato (S1PR1) y la coordinación de la residencia tisular. A través de su impacto en los umbrales de activación, las respuestas de citocinas y la dinámica de la sinapsis inmunológica, CD69 se estudia con frecuencia en vías que regulan la inflamación, la tolerancia inmunitaria y la defensa del hospedador. Se han descrito patrones alterados de expresión de CD69 en diversas enfermedades mediadas por el sistema inmunitario y en contextos de inmunología del cáncer, lo que respalda su uso como marcador mecanístico y nodo funcional en estudios de biología de los leucocitos.

CD69 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD69 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD69. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD69. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD69 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.