Plasmide CRISPR d'Activation (m2) CD69: sc-419566-ACT-2

Le gène murin Cd69 code CD69, un récepteur de surface inductible de type lectine C, rapidement surexprimé après la stimulation du récepteur de l’antigène ou par des cytokines, et constituant un marqueur précoce de l’activation des lymphocytes. CD69 module le trafic des cellules immunitaires et leur rétention tissulaire, notamment via la régulation de la signalisation du récepteur de la sphingosine-1-phosphate, et influence des programmes d’activation en aval, y compris des réponses associées à NF-κB et aux MAPK, qui façonnent la fonction effectrice des cellules T et des cellules NK. Une activité altérée de CD69 a été associée à une dérégulation immunitaire dans des modèles d’inflammation, d’auto-immunité et d’immunologie tumorale, reflétant son rôle dans l’équilibrage des signaux d’activation et de migration. L’édition du gène Cd69 chez la souris soutient des études mécanistiques sur la cinétique d’activation, la biologie des cellules immunitaires résidentes des tissus et l’analyse des perturbations de voies de signalisation dans des cellules primaires ou dans des modèles d’immunologie in vivo.

CD69 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cd69 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD69 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cd69 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cd69, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD69. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cd69 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD69 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD69 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cd69 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.