CD64 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420305-ACT

Das Mausgen **Fcgr1** kodiert **CD64 (FcγRI)**, einen hochaffinen Rezeptor für IgG, der überwiegend auf Monozyten, Makrophagen und dendritischen Zellen exprimiert wird. Dort koppelt er die Erkennung von Immunkomplexen an Phagozytose, oxidativen Burst und die Produktion von Zytokinen. CD64 signalisiert über das **ITAM-Motiv** der **FcR-γ-Kette** und aktiviert dadurch die Signalwege **SYK**, **PI3K**, **MAPK** und **NF-κB**, wodurch angeborene Immunaktivierung mit Antigenaufnahme und -verarbeitung integriert wird. Als Regulator antikörperabhängiger Effektorfunktionen ist **Fcgr1** in entzündlichen und autoimmunen Kontexten, in Infektionsmodellen sowie in der myeloiden Biologie tumorassoziierter Zellen breit untersucht; Veränderungen der CD64-Expression können dabei veränderte Aktivierungszustände und myeloide Differenzierung widerspiegeln. Seine Rolle im Umgang mit Immunkomplexen verknüpft **Fcgr1** zudem mit dem Crosstalk zum Komplementsystem, Fc-vermittelter Endozytose und nachgeschalteten Transkriptionsprogrammen, die Gewebeentzündungen prägen.

CD64 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Fcgr1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD64 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Fcgr1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Fcgr1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD64-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Fcgr1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD64-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD64-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Fcgr1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.