CD63 Double Nickase Plasmid (h): sc-400061-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD63 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD63 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD63 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD63 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD63: sc-365604
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD63 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD63 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD63 (Tetraspanin-30) ist ein weit verbreitet exprimiertes Tetraspanin, das auf späten Endosomen, Lysosomen und Exosomen angereichert ist. Dort trägt es zur Organisation tetraspaninangereicherter Mikrodomen bei, die den Transport von Membranproteinen und Signalprozesse koordinieren. Durch die Zusammenarbeit mit Integrinen und Immunrezeptoren reguliert CD63 die Reifung von Endosomen, das Andocken und die Fusion von Vesikeln, die Antigenverarbeitung sowie zelladhäsionsbezogene Signalwege. CD63 wird häufig als Marker extrazellulärer Vesikel verwendet und ist an Prozessen wie Immunmodulation, viralem Eintritt/Austritt und der Regulation der Proteaseaktivität in sekretorischen Granula beteiligt. Eine veränderte CD63-Expression oder -Lokalisation wurde mit Entzündungsreaktionen sowie Phänotypen der Invasion/Metastasierung von Krebszellen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien zu seiner Rolle in der Membrandynamik und interzellulären Kommunikation motiviert.
CD63 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD63-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD63 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD63-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD63-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.